豬瘟抗原檢測安全試劑盒

豬瘟E2（CSFV-E2）抗體ELISA檢測試劑盒，可以從豬的血液樣品中檢測到CSFV-E2抗體的量。微量板用CSFV-E2蛋白包被，將稀釋的豬血清樣品加入到微量孔中，樣品中CSFV-E2抗體將與包被的抗原形成抗原抗體復合物。非特異性抗體和其它血清蛋白被洗去。將堿性磷酸酶標記的抗豬IgG抗體加入孔中，與抗原抗體復合物結合，然后再洗去未反應的結合物。PNPP顯色劑作為底物被加入，如果CSFV-E2抗體存在，則顯黃色。顏色強度直接與樣品中的該抗體的量有關。

提供的試劑

包被板（Coated plates）：包被重組豬瘟E2蛋白抗原的微量板。

酶標二抗(Conjugate reagent)：堿性磷酸酶標記的抗豬抗體：內含蛋白穩定劑紅色染料的磷酸鹽緩沖液。

底物片(Substrate tablets) PNPP（4-**苯磷酸二鈉鹽）：用底物緩沖液溶解后使用。

底物緩沖液(Substrate buffer)：含有與酶反應相關物質的二乙醇胺緩沖液。

終止液(Stop Solution)：含有NaOH的二乙醇胺緩沖液。

樣品稀釋液(Sample Diluent)：含有蛋白穩定劑

洗液(Wash Buffer)：含有吐溫的磷酸鹽緩沖液（粉）。

陰性對照(Negative Control)：滅活的無CSFV抗體的磷酸鹽緩沖液：內含有蛋白穩定劑和die氮化鈉防腐劑（0.1% 重量/體積）及藍色染料。

陽性對照(Positive Control)：含特異性CSFV抗體的磷酸鹽緩沖液：內含有蛋白穩定劑和die氮化鈉防腐劑（0.1% 重量/體積）及紅色染料。

材料和設備要求（試劑盒未提供）

精確的微量移液器和一次性吸頭

8或12孔道的微量移液器

稀釋樣品的塑料管

蒸餾水或去離子水

含405nm波長的酶標儀

注意事項

1．處理各種試劑要小心。終止液中含有腐蝕性的強堿，如果濺到皮膚或眼中，用大量的清水洗滌。

2．把各種生物材料都看成具有潛在的生物危險性物，包括所有的外來樣品。在銷毀之前，要用漂白粉或其它強氧化劑，將用過的反應板和廢棄液進行消毒。

3．不要用嘴碰移液器。在使用試劑盒中的試劑和處理樣品的地方，不要吃東西，喝水或吸煙。

4．試劑盒僅供體外使用。

5．嚴格按照檢測規程操作才能取得較好的結果。

試劑的準備

1．底物試劑：取1片底物放入潔凈容器中，加入5.5-6ml的底物緩沖溶液，混合直到*溶解。本試劑很好是現用現配，配置好的底物溶液可以在+4℃下避光保存1周。請勿用手直接觸拿底物片。

2．洗液：將1袋洗液*倒入1升蒸餾水或去離子水中，混合使其*溶解。洗液可在+4℃保存1個月。

3．試劑盒中的其它成分可以直接使用，使用前要回溫至室溫（22-27℃）。

樣品的準備

每個樣品按照1:30稀釋，即在樣品稀釋板上用10μl樣品加290μl的樣品稀釋液，并在預稀釋板上記錄好樣品和對照的位置。

1．用旋渦混合器或振蕩器混合均勻。

2．每份樣品都要換一個未用過的新的吸頭。

試劑盒中的陽性和陰性對照不要稀釋！！

BioChek公司的CSFV-E2試劑盒可以通過兩種方式來進行實驗：一種是樣品孵育過夜來提高其敏感性；另一種是孵育較少時間來進行快速診斷。

雙重測試操作步驟

1．從密封袋中取出用CSFV-E2包被的反應板，在記錄紙上記錄樣品的位置。

2．在A1和B1孔中加入100μl的陰性對照。

3．在C1和D1孔中加入100μl的陽性對照。

4．將100μl稀釋好的樣品加入到相應的板孔中，用蓋子蓋住反應板，在室溫（22-27℃）下孵育60分鐘。孵育過夜（4-8℃）來提高其敏感度。

5．倒出孔中的內容物，用洗液洗4次(每孔300μl)。后一次倒轉反應板，在吸水紙上輕輕拍打。

6．各孔加100μl酶標二抗，用蓋子蓋住反應板，在室溫（22-27℃）下孵育30分鐘。

7．重復步驟5。

8．各孔加100μl底物試劑，用蓋子蓋住反應板，在室溫（22-27℃）下孵育15分鐘。

9．各孔加100μl終止液，終止反應。

10．空氣調零，以405nm的波長于酶標儀測定各孔的吸光度。

結果

為確保試驗有效，陰性對照的平均吸光度應該小于0.35，陽性對照的平均值和陰性對照的平均值之差應大于0.15。

實驗室中溫度的差異會造成OD值的偏高或偏低。根據實驗對照的結果判定實驗的有效性。

結果判定

樣品中抗體的相對含量可以參考陽性對照來計算，其關系可以通過S/P值（樣品和陽性對照的比值）來計算。

1．S/P值的計算

樣品的S/P值大于或等于0.5認為是陽性。

2．抗體滴度的計算

Log₁₀效價＝1.1×Log₁₀S/P + 3.361

逆對數＝效價

3．判定標準

S/P值效價范圍抗體狀況

≤0.499    ≤1070    陰性

≥0.500    ≥1071   陽性